pET28a-ORF3A（SARS-CoV-2）蛋白表達(dá)質(zhì)粒
啟動子T7
復(fù)制子pBR322
克隆菌株DH5a
培養(yǎng)條件37度
備注825bp
質(zhì)粒宿主大腸桿菌
質(zhì)粒用途蛋白表達(dá)
片段類型ORF
片段物種病毒
原核抗性Kan

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注意事項(xiàng)：轉(zhuǎn)化前請準(zhǔn)確查找該質(zhì)粒相應(yīng)的抗生素名稱、抗生素使用濃度、感受態(tài)名稱和培養(yǎng)溫度。
1、收到質(zhì)粒干粉后請先5000rpm離心1min，再加入20μl~50μl無菌水或 pH8.0 的 1*TE緩沖液來溶解質(zhì)粒，室溫放置1min；

2、從-80℃冰箱中取出相應(yīng)的感受態(tài)，置于冰盒上解凍，并做好標(biāo)記；

3、取2μl質(zhì)粒加至100μl感受態(tài)中，冰浴30min；

4、42℃熱激90s，再冰浴2min；

5、加入900μl無抗的LB液體培養(yǎng)基，180rpm震蕩培養(yǎng)45min；

6、6000rpm離心5min，僅留100ul上清混勻菌體沉淀；

7、混勻后的菌液加至對應(yīng)抗性的LB平板上，倒入適量玻璃珠，涂勻液體；

8、將平板正向培養(yǎng)1h，再倒置培養(yǎng)12h~16h；

9、挑取單克隆菌落至對應(yīng)抗性的LB液體培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)12h~16h，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要提取質(zhì)粒

pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-LATS1(human)-shRNA2基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-U6-MIR4262(human)-shRNA1-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-U6-IL4I1(human)-shRNA1-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-U6-Il4i1(mouse)-shRNA1-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-U6-YTHDC1(human)-shRNA1-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-U6-CCNDBP1(human)-shRNA3-PGK-EGFP(2A)Puro基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-EGFP(2A)Puro-LATS1(human)-shRNA3基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-U6-AHR(human)-shRNA2-PGK-EGFP-E2A-Puro基因沉默質(zhì)粒

pLVX-U6-AIM2(human)-shRNA2-PGK-Puro基因沉默質(zhì)粒

pLVshRNA-U6-CCNDBP1(human)-shRNA2-PGK-EGFP(2A)Puro基因沉默質(zhì)粒

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