重組蛋白需要使用表達系統(tǒng)來對其進行制備，其獲得途徑可以分為體外方法和體內(nèi)方法。兩種方法的前提都是應(yīng)用基因重組技術(shù)，獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體，之后將其轉(zhuǎn)入可以表達目的蛋白的宿主細胞從而表達特定的蛋白分子。
重組蛋白特性說明：
分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式，原核細胞表達的為凍干粉狀態(tài)，真核細胞表達的蛋白為溶液態(tài)保存，這樣使得蛋白非常穩(wěn)定，在 -80℃ 條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進行溶解，其中溶解的方法非常關(guān)鍵，因為溶解不好會降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細注意，這些都是用戶在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。
1）原核細胞表達的重組蛋白。 大腸桿菌表達的凍干蛋白，已經(jīng)從包涵體中提純，添加了蛋白保護劑，使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可，復(fù)溶凍干蛋白 100g，用 86l 的超純水，輕輕搖晃使蛋白溶解，再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可*溶解，一定不能使用渦旋儀進行快速振蕩或劇烈搖晃。
2）真核細胞表達的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯，還要進行翻譯后的加工，使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常，所以必須在真核細胞中進行，如哺乳動物細胞能夠識別和去除基因中的內(nèi)含子，對翻譯后的蛋白質(zhì)進行加工，這樣表達的蛋白質(zhì)具有生物活性。用溶液態(tài)來保存，保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
3）重組蛋白的保護劑。在凍干和儲存過程中常用的保護劑或穩(wěn)定劑有糖類，多元醇，聚合物，表面活性劑，某些蛋白和氨基酸等。我們通常加 8%（質(zhì)量比體積）的海藻糖和甘露醇作為凍干保護劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集，甘露醇也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護劑和填充劑。
更新時間：2022-01-04 
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